METODO DI BELLA > PRINCIPI ATTIVI > Somatostatina e/o Octreotide (analogo della somatostatina) > Il recettore del neuropeptide Y Y2 e il recettore della somatostatina sstr2 si accoppiano per mobilitare il calcio intracellulare nelle cellule umane di neuroblastoma SH-SY5Y.

 
Il recettore del neuropeptide Y Y2 e il recettore della somatostatina sstr2 si accoppiano per mobilitare il calcio intracellulare nelle cellule umane di neuroblastoma SH-SY5Y. di Connor M, Yeo A, Henderson G.
 
 
Data: 30/05/2003
Tipologia: MDB - Documentazione
Lingua: Inglese
Pubblicazione: Br J Pharmacol
Anno: 1997
Fonte: Br J Pharmacol 120(3):455-63.
 
 
Descrizione:

1.           Abbiamo studiato l’aumento, mediato dai recettori del neuropeptide Y (NPY) e della somatostatina (SRIF), della concentrazione intracellulare di Ca2+ ([ Ca2+]i) nella linea di cellule umane di neuroblastoma SH-SY5Y.


2.           Il colorante fura 2 sensibile al Ca(2+) è stato utilizzato per misurare il [Ca2+]i nei monostrati confluenti di cellule di SH-SY5Y. Né NPY (30-100 nM) né SRIF (100 nM) hanno fatto aumentare il [Ca2+]i se applicati da soli. Tuttavia, quando NPY (300 pM-1 microM) o SRIF (300 pM-1 microM) sono stati applicati in presenza di carbachol agonista del cholinoceptor (1 microM o 100 microM) hanno provocato un aumento del [Ca2+]i maggiore di quello causato dal solo carbachol.


3.           L'aumento del [Ca2+]i mediante NPY è indipendente dalla concentrazione di carbachol. In presenza di 1 microM o 100 microM di carbachol NPY ha elevato il [Ca2+]i con un pEC50 di 7.80 e 7.86 rispettivamente.


4.           In presenza di 1 microM di carbachol il peptide dell'agonista selettivo di NPY Y2 YY(3-36) (PYY(3-36)) ha elevato il [Ca2+]i con un pEC50 di 7.94, l'agonista selettivo di NPY Y1 [Leu31, Pro34]-NPY ha elevato il [Ca2+]i anche se applicato in presenza di carbachol, ma solo a concentrazioni > 300 nM. L'ordine di potenza, PYY(3-36) > o = NPY > > [Leu31, Pro34]-NPY indica che un recettore simile a NPY Y2 è coinvolto nell’aumento del [Ca2+]i.


5.           In presenza di 1 microM di carbachol, SRIF ha elevato il [Ca2+]i con un pEC50 di 8.24. L’analogo BIM-23027 con preferenza per il recettore sst2 (c[N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe ]) ha elevato [Ca2+]i con un pEC50 di 8.63 e l’analogo L-362855 con preferenza per il recettore sst5 (c[Aha-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe ]) ha elevato [Ca2+]i con un pEC50 di circa 6.1. L’applicazione dell’analogo BIM-23056 con preferenza per il recettore sst3 (D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-D-Nal-NH2, 1 microM) alle cellule di SH-SY5Y in presenza di carbachol non ha né aumentato il [Ca2+]i né ha influenzato gli aumenti di [Ca2+]i causati da una co-applicazione successiva di SRIF. L'ordine di potenza, BIM-23026 > o = SRIF > > L-362855 > > > BIM-23026 suggerisce che un recettore simile a sst2 è coinvolto nell'aumento del [Ca2+]i.


6.           Il blocco, da parte del carbachol, dell'attivazione dei recettori muscarinici con atropina (1 microM) ha abolito l'aumento di [Ca2+]i di SRIF e NPY.


7.           L’attivazione del recettore muscarinico, e non un aumento del [Ca2+]i, è stata necessaria per evidenziare la risposta di SRIF o di NPY. Anche il maitotoxin attivatore del canale di Ca2+ (2 NG ml-1) ha elevato il [Ca2+]i ma applicazioni successive di NPY o di SRIF in presenza di maitotoxin non hanno causato ulteriori cambiamenti del [Ca2+]i.


8.           Gli aumenti di [Ca2+]i causati da NPY e da SRIF sono stati aboliti mediante pretrattamento delle cellule con la tossina pertussis (200 ng-ml-1, 16 h). Questo trattamento non ha influenzato significativamente la risposta delle cellule al carbachol.


9.           NPY e SRIF sembra aumentino il [Ca2+]i mobilitando il Ca2+ dai depositi intracellulari. Sia NPY che SRIF hanno continuato ad elevare il [Ca2+]i se applicati in sostanza tampone esterna senza Ca(2+). Anche il Thapsigargin (100 nM), un agente che rilascia i depositi intracellulari di Ca2+, ha bloccato gli aumenti di [Ca2+]i di SRIF e di NPY.


10.       Anche gli agonisti dei recettori delta-Opioidi applicati in presenza di carbachol hanno elevato il [Ca2+]i nelle cellule SH-SY5Y. Quando NPY (30 nM) o SRIF (100 nM) è stato applicato insieme ad una concentrazione di massima efficacia dell'agonista del recettore delta-opioide DPDPE ([D-Pen2,5]-enkephalin) (1 microM), i risultanti aumenti di [Ca2+]i non erano maggiori di quelli causati dall'applicazione del solo DPDPE.


11.       Quindi, nelle cellule SH-SY5Y, NPY e SRIF possono mobilitare il Ca2+ dai depositi intracellulari attraverso l'attivazione di NPY Y2 e dei recettori simili a sst2, rispettivamente. Né NPY né SRIF hanno elevato il [Ca2+]i se applicati da soli. I requisiti per l’aumento del [Ca2+]i mediante NPY e SRIF sono gli stessi di quelli per la mobilizzazione del [Ca2+]i nelle cellule SH-SY5Y dei recettori delta e mu-opioidi e del recettore nociceptin.

 
 
 

1.           Abbiamo studiato l’aumento, mediato dai recettori del neuropeptide Y (NPY) e della somatostatina (SRIF), della concentrazione intracellulare di Ca2+ ([ Ca2+]i) nella linea di cellule umane di neuroblastoma SH-SY5Y.


2.           Il colorante fura 2 sensibile al Ca(2+) è stato utilizzato per misurare il [Ca2+]i nei monostrati confluenti di cellule di SH-SY5Y. Né NPY (30-100 nM) né SRIF (100 nM) hanno fatto aumentare il [Ca2+]i se applicati da soli. Tuttavia, quando NPY (300 pM-1 microM) o SRIF (300 pM-1 microM) sono stati applicati in presenza di carbachol agonista del cholinoceptor (1 microM o 100 microM) hanno provocato un aumento del [Ca2+]i maggiore di quello causato dal solo carbachol.


3.           L'aumento del [Ca2+]i mediante NPY è indipendente dalla concentrazione di carbachol. In presenza di 1 microM o 100 microM di carbachol NPY ha elevato il [Ca2+]i con un pEC50 di 7.80 e 7.86 rispettivamente.


4.           In presenza di 1 microM di carbachol il peptide dell'agonista selettivo di NPY Y2 YY(3-36) (PYY(3-36)) ha elevato il [Ca2+]i con un pEC50 di 7.94, l'agonista selettivo di NPY Y1 [Leu31, Pro34]-NPY ha elevato il [Ca2+]i anche se applicato in presenza di carbachol, ma solo a concentrazioni > 300 nM. L'ordine di potenza, PYY(3-36) > o = NPY > > [Leu31, Pro34]-NPY indica che un recettore simile a NPY Y2 è coinvolto nell’aumento del [Ca2+]i.


5.           In presenza di 1 microM di carbachol, SRIF ha elevato il [Ca2+]i con un pEC50 di 8.24. L’analogo BIM-23027 con preferenza per il recettore sst2 (c[N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Phe ]) ha elevato [Ca2+]i con un pEC50 di 8.63 e l’analogo L-362855 con preferenza per il recettore sst5 (c[Aha-Phe-Trp-D-Trp-Lys-Thr-Phe ]) ha elevato [Ca2+]i con un pEC50 di circa 6.1. L’applicazione dell’analogo BIM-23056 con preferenza per il recettore sst3 (D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-D-Nal-NH2, 1 microM) alle cellule di SH-SY5Y in presenza di carbachol non ha né aumentato il [Ca2+]i né ha influenzato gli aumenti di [Ca2+]i causati da una co-applicazione successiva di SRIF. L'ordine di potenza, BIM-23026 > o = SRIF > > L-362855 > > > BIM-23026 suggerisce che un recettore simile a sst2 è coinvolto nell'aumento del [Ca2+]i.


6.           Il blocco, da parte del carbachol, dell'attivazione dei recettori muscarinici con atropina (1 microM) ha abolito l'aumento di [Ca2+]i di SRIF e NPY.


7.           L’attivazione del recettore muscarinico, e non un aumento del [Ca2+]i, è stata necessaria per evidenziare la risposta di SRIF o di NPY. Anche il maitotoxin attivatore del canale di Ca2+ (2 NG ml-1) ha elevato il [Ca2+]i ma applicazioni successive di NPY o di SRIF in presenza di maitotoxin non hanno causato ulteriori cambiamenti del [Ca2+]i.


8.           Gli aumenti di [Ca2+]i causati da NPY e da SRIF sono stati aboliti mediante pretrattamento delle cellule con la tossina pertussis (200 ng-ml-1, 16 h). Questo trattamento non ha influenzato significativamente la risposta delle cellule al carbachol.


9.           NPY e SRIF sembra aumentino il [Ca2+]i mobilitando il Ca2+ dai depositi intracellulari. Sia NPY che SRIF hanno continuato ad elevare il [Ca2+]i se applicati in sostanza tampone esterna senza Ca(2+). Anche il Thapsigargin (100 nM), un agente che rilascia i depositi intracellulari di Ca2+, ha bloccato gli aumenti di [Ca2+]i di SRIF e di NPY.


10.       Anche gli agonisti dei recettori delta-Opioidi applicati in presenza di carbachol hanno elevato il [Ca2+]i nelle cellule SH-SY5Y. Quando NPY (30 nM) o SRIF (100 nM) è stato applicato insieme ad una concentrazione di massima efficacia dell'agonista del recettore delta-opioide DPDPE ([D-Pen2,5]-enkephalin) (1 microM), i risultanti aumenti di [Ca2+]i non erano maggiori di quelli causati dall'applicazione del solo DPDPE.


11.       Quindi, nelle cellule SH-SY5Y, NPY e SRIF possono mobilitare il Ca2+ dai depositi intracellulari attraverso l'attivazione di NPY Y2 e dei recettori simili a sst2, rispettivamente. Né NPY né SRIF hanno elevato il [Ca2+]i se applicati da soli. I requisiti per l’aumento del [Ca2+]i mediante NPY e SRIF sono gli stessi di quelli per la mobilizzazione del [Ca2+]i nelle cellule SH-SY5Y dei recettori delta e mu-opioidi e del recettore nociceptin.

 
 
 
 

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