Questo studio fornisce una valutazione dettagliata ed esatta delle interazioni fra il recettore della vitamina D3 (VDR), il recettore del retinoide X (RXR) e gli elementi sensibili alla vitamina D3 (VDREs) mediati da due nuovi 14-epianaloghi della 1,25-diidrossivitamina D [ 1,25(OH)2D3 ], 19-nor-14-epi-23-yne-1,25(OH)2D3 (TX 522) e 19-nor-14,20-bisepi-23-yne-1,25(OH)2D3 (TX 527). Entrambi gli analoghi sono più potenti (14- e 75-/voltefold, rispettivamente) della 1,25(OH)2D3 nell’inibizione della proliferazione delle cellule e nell'induzione di differenziazione delle cellule. Tuttavia, gli esperimenti DNA-indipendenti hanno indicato che entrambi gli analoghi hanno un'affinità più bassa con il VDR e che la stabilità della conformazione indotta del VDR, come misurato dalle analisi della digestione limitate della proteasi, erano simili (TX 527) o persino più deboli (TX 522) rispetto a quella indotta dal composto simile. Comunque, le analisi DNA-dipendenti, quali gli esperimenti dello spostamento del gel, hanno rivelato che quegli analoghi erano leggermente più potenti (3-7 volte) rispetto alla 1,25(OH)2D3 nel rafforzare il legame degli eterodimeri VDR-RXR con una ripetizione diretta spaziata da tre nucleotidi (DR3) di tipo VDRE. Le conseguenze funzionali delle interazioni del legame -VDR-RXR-VDRE osservate in vitro sono state successivamente valutate negli esperimenti di transfection/contagio con acido nucleico virale. Entrambi gli 14-epianaloghi hanno aumentato la trascrizione della VDRE che contiene più efficientemente i costrutti del reporter rispetto alla 1,25(OH)2D3 nelle cellule COS-1 e MCF-7 indipendentemente dalla presenza di chetoconazolo. L' attività di trans attivazione sembra essere un processo specifico delle cellule perché l'induzione massima di trascrizione e la concentrazione metà-massimale di trans attivazione per ogni costrutto del reporter erano differenti in entrambe le linee di cellule. L' attività di trans attivazione superagonistica assomiglia molto alla potenza biologica di questi analoghi sull'inibizione della proliferazione delle cellule MCF-7. Questi dati indicano chiaramente che l'attività superagonistica comincia oltre il legame del complesso di eterodimeri-leganti (VDR-RXR) con VDRE e perciò probabilmente coinvolge le molecole coattivatrici/corepressori.